这要根据你买的ECL不同，发光时间是不太一样的。而且还有你蛋白的量也有关系。
做Western Blot 化学发光（ECL）实验经常会有“淬灭”的情况发生，经常有朋友反映，加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光，可亮光很快就消逝了，压完片后，条带却很弱，甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么？要解释这种情况发生的原因，必须先了解ECL化学发光的原理。
%的Tween-20。 目的蛋白在体内存在多种修饰形式，如乙酰化，甲基化，磷酸化，糖基化等。可查阅文献，用合适的方法去除蛋白的修饰，或选择合适的抗体。 目的蛋白降解。重新准备蛋白样品，并加入足够的蛋白酶抑制剂。 发光液质量问题，可选用灵敏的，发光清晰的ECL发光液，如Enlight-plus。
可以的，荧光化学发光成像系统可以直接进行ECL成像，避免暗室曝光的不便，不仅可以对靶蛋白进行定性检测，还可以由此判定蛋白质表达量，对其进行相对定量分析，获得蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息，使用多色荧光进行实验，更可以做到精确定量分别；同时可以开展基于蛋白凝酸化的信号传导研究。
底物化学发光ECL（Enhanced Chemiluminescence）是目前研究中广泛采用的方法，其操作简便，只需要现成的试剂盒。其工作原理是通过HRP（过氧化酶标记的抗体）与过氧化物和鲁米诺反应，产生的化学发光可使胶片曝光，从而显示出条带。
